Начальные этапы клонального микроразмножения in vitro цитрусовых башкирской селекции

Авторы:
Билалова Э.Г. , Садыкова Л.Р. , Ишмуратова М.М.
Название:
Начальные этапы клонального микроразмножения in vitro цитрусовых башкирской селекции
Страницы:
153-156
скачано
19 раз(а)


Изучено влияние стерилизующих растворов на жизнеспособность эксплантов лимонов (Citrus limon (L.) Burm.) и цитрона (Citrus medica L.) в условиях in vitro. Проведена сравнительная характеристика роста лимона и цитрона башкирской селекции в условиях in vitro.
Введение
В последние годы для сохранения биоразнообразия лимонов успешно используются методы культуры in vitro [Самарина и др. (Samarina et al.), 2012; Самарина (Samarina), 2013]. В теплице круглогодичного действия учебно-опытного хозяйства ГБПОУ «Уфимского лесотехнического техникума» (Уфимском лимонарии) более 20 лет выращиваются лимоны (Citrus limon (L.) Burm.) узбекской селекции - сорта Юбилейный и Ташкентский [Садыкова (Sadykova), 2016]. Госсорткомиссией Российской Федерации описаны и внесены в Госреестр три сорта лимона «Урман», «Салават», «Лейсан» и два сорта цитрона «Уралтау» и «Зиля», описанные в Уфимском лимонарии. Эти сорта являются клонами сорта лимона «Юбилейный», оригинатор сортов - Ф.В. Садыкова. К настоящему времени собран большой фактический материал по особенностям биологии и выращивания в условиях закрытого грунта перечисленных сортов. Начаты исследования по клональному микроразмножению in vitro этих сортов [Билалова, Ишмуратова (Bilalova, Ishmuratova), 2016; 2017].
Целью работы является разработка протоколов клонального микроразмножения in vitro цитрусовых башкирской селекции.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования являлись 27-ми летние растения лимона сортов «Лейсан», «Салават» и цитрона «Уралтау». Для введения в культуру in vitro использовали молодые побеги текущего года вегетации. В качестве эксплантов использовали сегменты молодых побегов (узлы) размером 5-6 мм и семена из плодов. Стерилизацию растительного материала проводили по следующей схеме [Билалова, Ишмуратова (Bilalova, Ishmuratova), 2016]:
1. Промывка растительного материала в мыльном растворе;
2. Обработка 1 % раствором «бриллиант» (0,9-1,0% р-р акрилдиметил аммоний хлорида и 0,8-0,9% р-р глутарового альдегида и функциональные компоненты) с экспозицией 5-10 мин.
3. Обработка 0,1% р-ром диацида с экспозицией 25 мин.
4. Обработка 0,05% р-ром хлоргексидина с экспозицией 15 мин.
После каждого этапа стерилизации экспланты трижды промывали стерильной дистиллированной водой. Перед посадкой на питательную среду экспланты обрабатывали 10% стерильным раствором аскорбиновой кислоты в течение 5 мин для снятия эффекта «фенольного облака». В некоторых вариантах опыта использовали для стерилизации эксплантов раствор «доместос» (раствор гипохлорита натрия) и 96% раствор этанола (экспозиция 10–30 сек). Перед высадкой на питательную среду места срезов обновлялись. Проводили подсчет инфицированного и жизнеспособного материала.
В качестве питательной среды использовали модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга [Murashige, Skoog, 1962] с гормональными добавками 6-бензиламинопурин (6-БАП), 1-нафтилуксусная кислота (НУК) в различных концентрациях (0,1 мг/л – 1,0 мг/л), pH 5,5-5.8 с добавлением 10 г/л агара, 25 г/л сахарозы. Через 50 дней культивирования в среде у проросших из семян растений были проведены измерения побеговой и корневой систем, размера и числа листьев.
Результаты и их обсуждение
Результаты стерилизации эксплантов лимонов и цитрона башкирской селекции представлены в табл. 1. Из таблицы видно, что хорошие результаты независимо от сорта продемонстрировала дробная стерилизация эксплантов с использованием раствора «бриллиант», с последующим применением 96% этанола. Стерилизация с использованием «доместоса» оказалась менее эффективной. Стерилизация семян также оказалась эффективной в растворе «бриллианта» с применением этанола.
Результаты морфометрических измерений показаны в табл. 2.
Одновозрастные растения сортов лимона и цитрона при культивировании в условиях in vitro различаются по морфологическим характеристикам и сохраняют сортоспецифические признаки. Для лимона сорт Лейсан характерно меньшее число побегов, чем для цитрона сорт Уралтау. Побеги цитрона характеризуются большим числом крупных листьев (рис.1).
Рис.1. Цитрон сорт Уралтау в культуре in vitro
Fig. 1. Citron of Uraltau in in vitro culture
Таким образом, при стерилизации раствором «бриллиант» с последующей экспозицией в 96 % растворе этанола выход стерильных и жизнеспособных эксплантов выше, чем при использовании для стерилизации раствора «доместос». При культивировании в условиях in vitro сорта лимона и цитрона сохраняют сортоспецифичные признаки и различаются по темпам развития.
Таблица 1.
Влияние стерилизаторов на жизнеспособность эксплантов лимонов сорта Лейсан
и цитрона сорта Уралтау в условиях in vitro.
Table 1. Influence of sterilizers on the viability of Leysan lemon explants and Uraltau citron in vitro
Объект
Object Условия стерилизации
Sterilization conditions
  «бриллиант» + этанол
"brilliant" + ethanol «доместос»
domestos
доля стерильных эксплантов, %
share of sterile explants,% доля жизнеспособных эксплантов, %
share of viable explants,% доля стерильных эксплантов, %
share of viable explants, %
Узлы / Knots
Лимон сорт Лейсан
Lemon variety Leysan 25  65
  20 50
Лимон сорт Салават
Lemon variety Salavat 25 60  20  54
Семена / Seeds
Лимон сорт Лейсан
Lemon variety Leysan 85 85 - -
Лимон сорт Салават
Lemon variety Salavat 80 75 - -
Цитрон сорт Уралтау
Citron Uraltau 85 70 - -
Примечания: (-) - вариант эксперимента не был проведен.
Notes: ( - ) - the experiment was not conducted.
Таблица 2.
Сравнительная характеристика морфологических признаков лимона Лейсан
и цитрона Уралтау в условиях культуры in vitro.
Table 2. Comparative characteristics of the morphological features of Leysan lemon
and Uraltau citron under in vitro culture conditions.
Сорт Variety Число побегов, шт.
Number of shoots, pcs. Длина побега, см
Length of shoot, cm Длина корней, см
Root length, cm Число листьев на побеге, шт.
Number of leaves on the shoot, pcs. Размеры листьев, см
Size of leaves, сm
     Ширина
Width Длина
Length
Лейсан
Leysan 1,0±0,5 3,0±0,8 3,3±1,7 3,0±1,0 0,6±0,1 1,0±0,2
Уралтау
Uraltau 2,0±0,9 1,6±0,3 2,2±1,3 5,0±1,0 0,8±0,1 1,2±0,2
Заказ
Оформите заказ, наш сотрудник свяжется с вами для уточнения деталей.
Ваша заявка успешно отправлена!
Необходимо принять условия соглашения
Вы заполнили не все обязательные поля
Произошла ошибка, попробуйте ещё раз

Обратный звонок
Представьтесь, мы вам перезвоним.
Ваша заявка успешно отправлена!
Необходимо принять условия соглашения
Вы заполнили не все обязательные поля
Произошла ошибка, попробуйте ещё раз