Варианты ПЦР с более чем двумя праймерами. I. Вложенная ПЦР
21.08.2024
Авторы:
Название:
Варианты ПЦР с более чем двумя праймерами. I. Вложенная ПЦР
Страницы:
214-233
Вложенная полимеразная цепная реакция (влПЦР) представляет собой двухстадийную ПЦР, в которой в первом раунде используется внешняя пара праймеров, ведущая к образованию ампликона, содержащего места отжига для внутренней пары праймеров. Эти внутренние праймеры, в свою очередь, образуют ампликон меньшего размера. Существует также вариант полувложенной ПЦР (пвлПЦР), при котором во втором раунде используется один внутренний праймер в паре с одним из внешних. Вложенная ПЦР в первую очередь предназначена для повышения чувствительности реакции за счет увеличения числа копий целевой последовательности в первом раунде для их использования во втором. Кроме того, она обеспечивает специфичность амплификации и отжига праймеров. Внутренние праймеры отжигаются на ампликоне первого раунда, подтверждая правильность отжига внешних праймеров. Существуют различные методы разделения реакционной смеси первого раунда от внутренних праймеров перед вторым раундом амплификации, которые подробно описаны в этом обзоре. Описаны различные вариации влПЦР и практическое применение этого подхода для амплификации целевых последовательностей и анализа ампликонов, включая выявление полиморфизмов ДНК. Отмечено использование вложенной ПЦР для решения задач небиологического характера.
- Баймиев Ан.Х., Баймиев Ал.Х., Кулуев Б.Р., Швец К.Ю., Ямиданов Р.С., Матниязов Р.Т., Чемерис Д.А., Зубов В.В., Алексеев Я.И., Мавзютов А.Р., Иваненков Я.А., Чемерис А.В. Современные подходы к дифференциации живых и мертвых бактерий с помощью избирательной амплификации нуклеиновых кислот // Микробиология. 2020. Т. 89, № 1. С. 17–33. DOI:10.31857/S0026365620010036. 2. Гарафутдинов Р.Р., Баймиев Ан.Х., Малеев Г.В., Алексеев Я.И., Зубов В.В., Чемерис Д.А., Кирьянова О.Ю., Губайдуллин И.М., Матниязов Р.Т., Сахабутдинова А.Р., Никоноров Ю.М., Кулуев Б.Р., Баймиев Ал.Х., Чемерис А.В. Разнообразие праймеров для ПЦР и принципы их подбора // Biomics. 2019. Т.11(1). С. 23 – 70. DOI:10.31301/2221-6197.bmcs.2019-04 3. Гарафутдинов Р.Р., Сахабутдинова А.Р., Алексеев Я.И., Чемерис А.В. Гендерные локусы в ДНК-криминалистике и женском спорте // Biomics. 2021. Т.13(1). С. 54-74. DOI:10.31301/2221-6197.bmcs.2021-6 4. Гарафутдинов Р.Р., Чемерис Д.А., Мавзютов а.Р., Ахметзянова Л.У., Давлеткулов Т.М., Губайдуллин И.М., Чемерис А.В. Петлевая LAMP амплификация нуклеиновых кислот. I. Два десятилетия развития и совершенствования // Biomics. 2021. Т.13(2). С. 176-226. DOI: 10.31301/2221-6197.bmcs.2021-14 5. Гарафутдинов Р.Р., Чемерис Д.А., Михайленко К.И., Зубов В.В., Чемерис А.В. Cтруктура продуктов классической ПЦР и причины выхода реакции на плато // Biomics. 2024. Т.16(1). С. 18-32. DOI:10.31301/2221-6197.bmcs.2024-3 6. Кулуев Б.Р., Баймиев Ан.Х., Геращенков Г.А., Чемерис Д.А., Зубов В.В., Кулуев А.Р., Баймиев Ал.Х., Чемерис А.В. Методы ПЦР для выявления мультилокусного полиморфизма ДНК у эукариот, основанные на случайном праймировании // Генетика. 2018. Т. 54. № 5. С. 495–511. 7. Чемерис А.В., Магданов Э.Г., Гарафутдинов Р.Р., Вахитов В.А. Как исключить появление ложно-позитивных результатов при проведении полимеразной цепной реакции? // Вестн. биотехнол. физ.-хим. биол. 2012. Т. 8(3). С. 34-45. 8. Чемерис Д.А., Гарафутдинов Р.Р., Кулуев А.Р., Сахабутдинова А.Р., Кулуев Б.Р., Чемерис А.В. Разнообразие методов детекции полиморфных нуклеотидов в известных снипах. III. Аллель-специфичная ПЦР // Biomics. 2021. Т.14(1). С. 32-51. DOI:10.31301/2221-6197.bmcs.2022-2 9. Чемерис Д.А., Кирьянова О.Ю., Губайдуллин И.М., Чемерис А.В. Дизайн праймеров для полимеразной цепной реакции (краткий обзор компьютерных программ и баз данных) // Biomics. 2016. Т. 8. № 3. С. 215-238. 10. Abath F.G., Melo F.L., Werkhauser R.P., Montenegro L., Montenegro R., Schindler H.C. Single-tube nested PCR using immobilized internal primers // Biotechniques. 2002. V. 33(6). PP. 1210-1214. doi:10.2144/02336bm05. 11. Alexander A., Subramanian N., Buxbaum J.N., Jacobson D.R. Drop-in, drop-out allele-specific PCR: a highly sensitive, single-tube method // Mol. Biotechnol. 2004. V. 28(3). PP. 171-174. doi:10.1385/MB:28:3:171. 12. Alirezaei M., Mosawi S.H., Afgar A., Zarean M., Movahhed T.K., Abbasi V., Fotouhi-Ardakani R. Discrimination of human papillomavirus genotypes using innovative technique nested-high resolution melting // Sci. Rep. 2022. V. 12(1). 13943. doi:10.1038/s41598-022-14730-9. 13. Allan B., Smuts H., Steyn L.M. Modified reaction tubes for the sequential addition of reagents in PCR assays // Nucleic Acids Res. 1994. V. 22(1). PP. 109-110. doi:10.1093/nar/22.1.109. 14. Alzahrani A.J., Vallely P.J., McMahon R.F. Development of a novel nested in situ PCR-ISH method for detection of hepatitis C virus RNA in liver tissue // J. Virol. Methods. 2002 V. 99(1-2). PP. 53-61. doi:10.1016/s0166-0934(01)00383-4. 15. Antal Z., Rascle C., Fèvre M., Bruel C. Single oligonucleotide nested PCR: a rapid method for the isolation of genes and their flanking regions from expressed sequence tags // Curr. Genet. 2004. V. 46(4). PP. 240-246. doi:10.1007/s00294-004-0524-6. 16. Avgeris M., Adamopoulos P.G., Galani A., Xagorari M., Gourgiotis D., Trougakos I.P., Voulgaris N., Dimopoulos M.A., Thomaidis N.S., Scorilas A. Novel Nested-Seq Approach for SARS-CoV-2 Real-Time Epidemiology and In-Depth Mutational Profiling in Wastewater // Int. J. Mol. Sci. 2021. V. 22(16). 8498. doi:10.3390/ijms22168498. 17. Bascuñana C.R., Belák K. Detection and identification of mycobacteria in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by nested PCR and restriction enzyme analysis // J. Clin. Microbiol. 1996. V. 34(10). PP. 2351-2355. doi:10.1128/jcm.34.10.2351-2355.1996. 18. Brisco MJ, Bartley PA, Morley AA. Antisense PCR: A simple and robust method for performing nested single-tube PCR // Anal Biochem. 2011. V.409(2). P.176-182. doi:10.1016/j.ab.2010.10.030 19. Chen F., Suttle C.A. Nested PCR with three highly degenerate primers for amplification and identification of DNA from related organisms. Biotechniques. 1995. V.18(4). P.609-612. 20. Costa J., Mafra I., Kuchta T., Oliveira M.B. Single-tube nested real-time PCR as a new highly sensitive approach to trace hazelnut // J. Agric. Food Chem. 2012. V. 60(33). PP. 8103-8110. doi:10.1021/jf302898z. 21. Daskou M., Tsakogiannis D., Dimitriou T.G., Manali M., Apti C., Amoutzias G.D., Mossialos D., Kottaridi C., Markoulatos P. Α 2-stage, nested-like nucleic acid amplification method (IsoPCR) for the highly sensitive detection of HPV16 and HPV18 DNA // Mol. Cell. Probes. 2019. V. 45. PP. 1-7. doi:10.1016/j.mcp.2019.03.003. 22. Daskou M., Tsakogiannis D., Alexopoulou D.S., Dimitriou T.G., Mossialos D., Amoutzias G.D., Kottaridi C., Markoulatos P. A colorimetric IsoPCR for the rapid and sensitive visual detection of high-risk HPV16 in clinical samples with hydroxynaphthol blue // J. Virol. Methods. 2021. V. 290. 114072. doi:10.1016/j.jviromet.2021.114072. 23. Eltahir Y.M., Dovas C.I., Papanastassopoulou M., Koumbati M., Giadinis N., Verghese-Nikolakaki S., Koptopoulos G. Development of a semi-nested PCR using degenerate primers for the generic detection of small ruminant lentivirus proviral DNA // J. Virol. Methods. 2006. V. 135(2). PP. 240-246. doi:10.1016/j.jviromet.2006.03.010. 24. Ferguson D.A. Jr., Jiang C., Chi D.S., Laffan J.J., Li C., Thomas E. Evaluation of two string tests for obtaining gastric juice for culture, nested-PCR detection, and combined single- and double-stranded conformational polymorphism discrimination of Helicobacter pylori // Dig. Dis. Sci. 1999. V. 44(10). PP. 2056-2062. doi:10.1023/a:1026630620442. 25. Fuehrer H.P., Fally M.A., Habler V.E., Starzengruber P., Swoboda P., Noedl H. Novel nested direct PCR technique for malaria diagnosis using filter paper samples // J. Clin. Microbiol. 2011. V. 49(4). PP. 1628-1630. doi:10.1128/JCM.01792-10. 26. Garafutdinov R.R., Chemeris D.A., Sakhabutdinova A.R., Kiryanova O.Y., Mikhaylenko C.I., Chemeris A.V. Encoding of non-biological information for its long-term storage in DNA // Biosystems. 2022. V. 215-216. 104664. doi:10.1016/j.biosystems.2022.104664 27. Garson J.A., Tedder R.S., Briggs M., Tuke P., Glazebrook J.A., Trute A., Parker D., Barbara J.A., Contreras M., Aloysius S. Detection of hepatitis C viral sequences in blood donations by "nested" polymerase chain reaction and prediction of infectivity // Lancet. 1990. V. 335(8703). PP. 1419-1422. doi:10.1016/0140-6736(90)91446-h. 28. Gomes A.L., Silva A.M., Cordeiro M.T., Guimarães G.F., Marques E.T. Jr., Abath F.G. Single-tube nested PCR using immobilized internal primers for the identification of dengue virus serotypes // J. Virol. Methods. 2007. V. 145(1). PP. 76-79. doi:10.1016/j.jviromet.2007.05.003. 29. Grace M.B., Buzard G.S., Hughes M.R., Gore-Langton R.E. Degradable dUMP outer primers in merged tandem (M/T)-nested PCR: low- and single-copy DNA target amplification // Anal. Biochem. 1998. V. 263(1). PP. 85-92. doi:10.1006/abio.1998.2771. 30. Green M.R., Sambrook J. Nested Polymerase Chain Reaction (PCR) // Cold Spring Harb. Protoc. 2019. V. 2019(2). doi:10.1101/pdb.prot095182. 31. Guo X., Zhu Y., Pan Z., Pan H., Li H. Single primer site-specific nested PCR for accurate and rapid genome-walking // J. Microbiol. Methods. 2024. V. 220. 106926. doi:10.1016/j.mimet.2024.106926. 32. Haff L.A. Improved quantitative PCR using nested primers // PCR Methods Appl. 1994. V. 3(6). PP. 332-337. doi:10.1101/gr.3.6.332. 33. Hamprecht K., Mikeler E., Jahn G. Semi-quantitative detection of cytomegalovirus DNA from native serum and plasma by nested PCR: influence of DNA extraction procedures // J. Virol. Methods. 1997. V. 69(1-2). PP. 125-135. doi:10.1016/s0166-0934(97)00148-1. 34. Homan W., van Gorkom T., Kan Y.Y., Hepener J. Characterization of Cryptosporidium parvum in human and animal feces by single-tube nested polymerase chain reaction and restriction analysis // Parasitol. Res. 1999. V. 85(8-9). PP. 707-712. doi:10.1007/s004360050619. 35. Hornes E., Wasteson Y., Olsvik O. Detection of Escherichia coli heat-stable enterotoxin genes in pig stool specimens by an immobilized, colorimetric, nested polymerase chain reaction // J. Clin. Microbiol. 1991. V. 29(11). PP. 2375-2379. doi:10.1128/jcm.29.11.2375-2379.1991. 36. Huang X.Q., Cloutier S. Hemi-nested touchdown PCR combined with primer-template mismatch PCR for rapid isolation and sequencing of low molecular weight glutenin subunit gene family from a hexaploid wheat BAC library // BMC Genet. 2007. V. 8. 18. doi:10.1186/1471-2156-8-18. 37. Kashiwamura S., Yamamoto M., Kameda A., Shiba T., Ohuchi A. Potential for enlarging DNA memory: the validity of experimental operations of scaled-up nested primer molecular memory // Biosystems. 2005. V. 80(1). PP. 99-112. doi:10.1016/j.biosystems.2004.10.007. 38. Keller M., Naue J., Zengerle R., von Stetten F., Schmidt U. Automated Forensic Animal Family Identification by Nested PCR and Melt Curve Analysis on an Off-the-Shelf Thermocycler Augmented with a Centrifugal Microfluidic Disk Segment // PLoS One. 2015. V. 10(7). e0131845. doi:10.1371/journal.pone.0131845. 39. Kemp D.J., Churchill M.J., Smith D.B., Biggs B.A., Foote S.J., Peterson M.G., Samaras N., Deacon N.J., Doherty R. Simplified colorimetric analysis of polymerase chain reactions: detection of HIV sequences in AIDS patients // Gene. 1990. V. 94(2). PP. 223-228. doi:10.1016/0378-1119(90)90391-4. 40. Kemp D.J., Smith D.B., Foote S.J., Samaras N., Peterson M.G. Colorimetric detection of specific DNA segments amplified by polymerase chain reactions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. V. 86(7). PP. 2423-2427. doi:10.1073/pnas.86.7.2423. 41. Kim B.J., Lee K.H., Park B.N., Kim S.J., Park E.M., Park Y.G., Bai G.H., Kim S.J., Kook Y.H. Detection of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis in sputa by nested PCR-linked single-strand conformation polymorphism and DNA sequencing // J. Clin. Microbiol. 2001. V. 39(7). PP. 2610-2617. doi:10.1128/JCM.39.7.2610-2617.2001. 42. Kusser W.C., Levin D.B., Glickman B.W. Sensitive two-stage PCR of p53 genomic DNA exons 5-9 // PCR Methods Appl. 1993. V. 2(3). PP. 250-252. doi:10.1101/gr.2.3.250. 43. Levinson G., Maddalena A., Palmer F.T., Harton G.L., Bick D.P., Howard-Peebles P.N., Black S.H., Schulman J.D. Improved sizing of fragile X CCG repeats by nested polymerase chain reaction // Am. J. Med. Genet. 1994. V. 51(4). PP. 527-534. doi:10.1002/ajmg.1320510448. 44. Li J., Liu Y.X., Zhao Z.T. Genotyping of hantaviruses occurring in Linyi, China, by nested RT-PCR combined with single-strand conformation polymorphism analysis // Acta Virol. 2009. V. 53(2). PP. 121-124. doi:10.4149/av_2009_02_121. 45. Li J.S., Tong S.P., Vitvitski L., Trépo C. Single-step nested polymerase chain reaction for detection of different genotypes of hepatitis C virus // J. Med. Virol. 1995. V. 45(2). PP. 151-155. doi:10.1002/jmv.1890450207. 46. Li W., Han L., Yu P., Ma C., Wu X., Xu J. Nested PCR-denaturing gradient gel electrophoresis analysis of human skin microbial diversity with age // Microbiol. Res. 2014. V. 169(9-10). PP. 686-692. doi:10.1016/j.micres.2014.02.008. 47. Lok K.S., Lee P.P.F., Kwok Y.C. et al. Nested PCR in magnetically actuated circular closed-loop PCR microchip system // Microchim. Acta. 2012. V. 177. PP. 111–117. doi:10.1007/s00604-012-0760-2. 48. Luptáková L., Bábelová A., Omelka R., Kolena B., Vondráková M., Bauerová M. Sex determination of early medieval individuals through nested PCR using a new primer set in the SRY gene // Forensic Sci. Int. 2011. V. 207(1-3). P. 1-5. doi:10.1016/j.forsciint.2010.08.012. 49. Menschikowski M., Vogel M., Eckey R., Dinnebier G., Jaross W. In situ reverse transcriptase-nested polymerase chain reaction to identify intracellular nucleic acids without the necessity of DNAse pretreatment and hybridisation // Anal. Cell. Pathol. 2001. V. 22(3). PP. 151-158. doi:10.1155/2001/654016. 50. Molina F.I., Geletka L.M., Jong S.C., Zhang Y. Use of a nested primer pair as control for PCR amplification of ribosomal DNA internal transcribed spacers in fungi // Biotechniques. 1994. V. 16(6). PP. 998-1000, 1002. 51. Moser D.A., Neuberger E.W., Simon P. A quick one-tube nested PCR-protocol for EPO transgene detection // Drug Test Anal. 2012. V. 4(11). PP. 870-875. doi:10.1002/dta.1348. 52. Mullis K., Faloona F., Scharf S., Saiki R., Horn G., Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1986. V. 51. Pt 1. PP. 263-273. doi:10.1101/sqb.1986.051.01.032. 53. Mullis K.B., Faloona F.A. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction // Methods Enzymol. 1987. V. 155. PP. 335-350. doi:10.1016/0076-6879(87)55023-6. 54. Olmos A., Cambra M., Esteban O., Gorris M.T., Terrada E. New device and method for capture, reverse transcription and nested PCR in a single closed-tube // Nucleic Acids Res. 1999. V. 27(6). PP. 1564-1565. doi:10.1093/nar/27.6.1564. 55. Park D.J. 3' RACE LaNe: a simple and rapid fully nested PCR method to determine 3'-terminal cDNA sequence // Biotechniques. 2004. V. 36(4). PP. 586-588. doi:10.2144/04364BM04. 56. Pecharatana S., Pickett M.A., Watt P.J., Ward M.E. Genotyping ocular strains of Chlamydia trachomatis by single-tube nested PCR // PCR Methods Appl. 1993. V. 3(3). PP. 200-204. doi:10.1101/gr.3.3.200. 57. Perrott P., Smith G., Ristovski Z., Harding R., Hargreaves M. A nested real-time PCR assay has an increased sensitivity suitable for detection of viruses in aerosol studies // J. Appl. Microbiol. 2009. V. 106(5). PP. 1438-1447. doi:10.1111/j.1365-2672.2008.04119.x. 58. Porter-Jordan K., Rosenberg E.I., Keiser J.F., Gross J.D., Ross A.M., Nasim S., Garrett C.T. Nested polymerase chain reaction assay for the detection of cytomegalovirus overcomes false positives caused by contamination with fragmented DNA // J. Med. Virol. 1990. V. 30(2). PP. 85-91. doi:10.1002/jmv.1890300202. 59. Pöschl B., Waneesorn J., Thekisoe O., Chutipongvivate S., Karanis P. Comparative diagnosis of malaria infections by microscopy, nested PCR, and LAMP in northern Thailand // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2010. V. 83(1). PP. 56-60. doi:10.4269/ajtmh.2010.09-0630. 60. Qin J., Xu M., Zhang Q., Wen X., He S., Zhou Y., Liu H., Zhou W. A Nested Asymmetric PCR Melting Curve Assay for One-Step Genotyping of Nondeletional α-Thalassemia Mutations // J. Mol. Diagn. 2020. V. 22(6). PP. 794-800. doi:10.1016/j.jmoldx.2020.03.002. 61. Ratge D., Scheiblhuber B., Landt O., Berg J., Knabbe C. Two-round rapid-cycle RT-PCR in single closed capillaries increases the sensitivity of HCV RNA detection and avoids amplicon carry-over // J. Clin. Virol. 2002. V. 24(3). PP. 161-172. doi:10.1016/s1386-6532(01)00244-x. 62. Raza M.H., Desai S., Aravamudhan S., Zadegan R. An outlook on the current challenges and opportunities in DNA data storage // Biotechnol. Adv. 2023. V. 66. 108155. doi:10.1016/j.biotechadv.2023.108155. 63. Rusková M., Bučková M., Puškárová A., Cíchová M., Janská V., Achs A., Šubr Z., Kuchta T., Pangallo D. Comparison of ordinary reverse transcription real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) with a newly developed one-step single-tube nested real-time RT-PCR (OSN-qRT-PCR) for sensitive detection of SARS-CoV-2 in wastewater // Environ. Sci. Pollut. Res. Int. 2023. V. 30(42). PP. 95579-95589. doi:10.1007/s11356-023-29123-2. 64. Salazar M.P., da Costa Lima Suassuna Monteiro J.F., Veloso Carvalho-Silva W.H., Nunes Diniz G.T., Werkhauser R.P., Lapa Montenegro L.M., Schindler H.C. Development and evaluation of a single-tube nested PCR with colorimetric assay for Mycobacterium tuberculosis detection // Biotechniques. 2024. V. 76(6). PP. 235-244. doi:10.2144/btn-2023-0080. 65. Schierwater B., Metzler D., Krüger K., Streit B. The effects of nested primer binding sites on the reproducibility of PCR: mathematical modeling and computer simulation studies // J. Comput. Biol. 1996. V. 3(2). PP. 235-251. doi:10.1089/cmb.1996.3.235. 66. Schlayer H.J., Peters T., Preisler S., Fehr J., Gerok W., Rasenack J. Amplification of unknown DNA sequences by sequence-independent nested polymerase chain reaction using a standardized adaptor without specific primers // J. Virol. Methods. 1992. V. 38(3). PP. 333-41. doi:10.1016/0166-0934(92)90078-r. 67. Sciancalepore A.G., Polini A., Mele E., Girardo S., Cingolani R., Pisignano D. Rapid nested-PCR for tyrosinase gene detection on chip // Biosens. Bioelectron. 2011. V. 26(5). PP. 2711-2715. doi:10.1016/j.bios.2010.09.008. 68. Sessa R., Schiavoni G., Di Pietro M., Petrucca A., Cipriani P., Puopolo M., Zagaglia C., Fallucca S., Del Piano M. Chlamydia pneumoniae in PBMC: reproducibility of the OMPA nested touchdown PCR // Int. J. Immunopathol. Pharmacol. 2005. V. 18(1). PP. 113-120. doi:10.1177/039463200501800112. 69. Shatleh-Rantisi D., Tamimi A., Ashhab Y. Improving sensitivity of single tube nested PCR to detect fastidious microorganisms // Heliyon. 2020. V. 6(1). e03246. doi:10.1016/j.heliyon.2020.e03246. 70. Shaw A.G., Mampuela T.K., Lofiko E.L. et al. Sensitive poliovirus detection using nested PCR and nanopore sequencing: a prospective validation study // Nat. Microbiol. 2023. V. 8(9). PP. 1634-1640. doi:10.1038/s41564-023-01453-4. 71. Shimano S., Sambe M., Kasahara Y. Application of nested PCR-DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) for the analysis of ciliate communities in soils // Microbes Environ. 2012. V. 27(2). PP. 136-141. doi:10.1264/jsme2.me11287. 72. Shuga J., Zeng Y., Novak R., Lan Q., Tang X., Rothman N., Vermeulen R., Li L., Hubbard A., Zhang L., Mathies R.A., Smith M.T. Single molecule quantitation and sequencing of rare translocations using microfluidic nested digital PCR // Nucleic Acids Res. 2013. V. 41(16). e159. doi:10.1093/nar/gkt613. 73. Smit V.T., Boot A.J., Smits A.M., Fleuren G.J., Cornelisse C.J., Bos J.L. KRAS codon 12 mutations occur very frequently in pancreatic adenocarcinomas // Nucleic Acids Res. 1988. V. 16(16). PP. 7773-7782. doi:10.1093/nar/16.16.7773. 74. Søe M.J., Rohde M., Mikkelsen J., Warthoe P. IsoPCR: an analytically sensitive, nested, multiplex nucleic acid amplification method // Clin. Chem. 2013. V. 59(2). PP. 436-439. doi:10.1373/clinchem.2012.193664. 75. Søe M.J., Warthoe P. RT-isoPCR: nested, high multiplex mRNA amplification // Analyst. 2013. V. 138(20). PP. 5871-5874. doi:10.1039/c3an00803g. 76. Soejima T., Schlitt-Dittrich F., Yoshida S. Rapid detection of viable bacteria by nested polymerase chain reaction via long DNA amplification after ethidium monoazide treatment // Anal. Biochem. 2011. V. 418. № 2. P. 286-289. doi:10.1016/j.ab.2011.06.033. 77. Song E.Y., Chung H.Y., Joo S.Y., Roh E.Y., Seong M.W., Shin Y., Park M.H. Detection of HLA-DRB1 microchimerism using nested polymerase chain reaction and single-strand conformation polymorphism analysis // Hum. Immunol. 2012. V. 73(3). PP. 291-297. doi:10.1016/j.humimm.2011.12.016. 78. Song X., Shah Sh., Reif J. Multidimensional Data Organization and Random Access in Large-Scale DNA Storage Systems // bioRxiv. 2019. doi:10.1101/743369. 79. Stephensen C.B., Casebolt D.B., Gangopadhyay N.N. Phylogenetic analysis of a highly conserved region of the polymerase gene from 11 coronaviruses and development of a consensus polymerase chain reaction assay // Virus Res. 1999. V. 60(2). PP. 181-189. doi:10.1016/s0168-1702(99)00017-9. 80. Sue M.J., Yeap S.K., Omar A.R., Tan S.W. Application of PCR-ELISA in molecular diagnosis // Biomed. Res. Int. 2014. V. 2014. 653014. doi:10.1155/2014/653014. 81. Tamme R., Camp E., Kortschak R.D., Lardelli M. Nonspecific, nested suppression PCR method for isolation of unknown flanking DNA // Biotechniques. 2000. V. 28(5). PP. 895-899. doi:10.2144/00285st02. 82. Trka J., Divoky V., Lion T. Prevention of product carry-over by single tube two-round (ST-2R) PCR: application to BCR-ABL analysis in chronic myelogenous leukemia // Nucleic Acids Res. 1995. V. 23(22). PP. 4736-4737. doi:10.1093/nar/23.22.4736. 83. Van Loock M., Verminnen K., Messmer T.O., Volckaert G., Goddeeris B.M., Vanrompay D. Use of a nested PCR-enzyme immunoassay with an internal control to detect Chlamydophila psittaci in turkeys // BMC Infect. Dis. 2005. V. 5. P. 76. doi:10.1186/1471-2334-5-76. 84. Vissers E.W., Bodelier P.L., Muyzer G., Laanbroek H.J. A nested PCR approach for improved recovery of archaeal 16S rRNA gene fragments from freshwater samples // FEMS Microbiol. Lett. 2009. V. 298(2). PP. 193-198. doi:10.1111/j.1574-6968.2009.01718.x. 85. Walsh E.E., Falsey A.R., Swinburne I.A., Formica M.A. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for diagnosis of respiratory syncytial virus infection in adults: use of a single-tube "hanging droplet" nested PCR // J. Med. Virol. 2001. V. 63(3). PP. 259-263. doi:10.1002/1096-9071(200103)63:3<259::AID-JMV1010>3.0.CO;2-X. 86. Wan G., Lim Q.E., Too H.P. High-performance quantification of mature microRNAs by real-time RT-PCR using deoxyuridine-incorporated oligonucleotides and hemi-nested primers // RNA. 2010. V. 16(7). PP. 1436-1445. doi:10.1261/rna.2001610. 87. Wang H.M., Ma W.L., Huang H., Xiao W.W., Wang Y., Zheng W.L. DNA microarray probe preparation by gel isolation nested PCR // J. Biochem. Mol. Biol. 2004. V. 37(3). PP. 356-361. doi:10.5483/bmbrep.2004.37.3.356. 88. Wang J., Cai K., Zhang R., He X., Shen X., Liu J., Xu J., Qiu F., Lei W., Wang J., Li X., Gao Y., Jiang Y., Xu W., Ma X. Novel One-Step Single-Tube Nested Quantitative Real-Time PCR Assay for Highly Sensitive Detection of SARS-CoV-2 // Anal. Chem. 2020. V. 92(13). PP. 9399-9404. doi:10.1021/acs.analchem.0c01884. 89. Wang J., Zhao L., Sun Z., Li G., Niu P., Li D., Wang L., Zhang Y., Feng Z., Ma X. Development of an innovative one-step nested PCR strategy for virus detection using the LNA technique // Sci. China Life Sci. 2019. V. 62(3). PP. 428-430. doi:10.1007/s11427-018-9347-1. 90. Wang L.F., Rakela J., Laskus T. Head-to-tail primer tandem repeats generated in hemi-nested PCR // Mol. Cell. Probes. 1997. V. 11(5). PP. 385-387. doi:10.1006/mcpr.1997.0122. 91. Wang L.T., Smith A., Iacopetta B., Wood D.J., Papadimitriou J.M., Zheng M.H. Nested PCR-SSCP assay for the detection of p53 mutations in paraffin wax embedded bone tumours: improvement of sensitivity and fidelity // Clin. Mol. Pathol. 1996. V. 49(3). M176-8. doi:10.1136/mp.49.3.m176. 92. Wang Z., Ye S., Li J., Zheng B., Bao M., Ning G. Fusion primer and nested integrated PCR (FPNI-PCR): a new high-efficiency strategy for rapid chromosome walking or flanking sequence cloning // BMC Biotechnol. 2011. V. 11. 109. doi:10.1186/1472-6750-11-109. 93. Wolff C., Hörnschemeyer D., Wolff D., Kleesiek K. Single-tube nested PCR with room-temperature-stable reagents // PCR Methods Appl. 1995. V. 4(6). PP. 376-379. doi:10.1101/gr.4.6.376. 94. Xu W.J., Li Q.L., Yao C.J., Wang Z.X., Zhao Y.X., Qiao Z.D. Semi-nested PCR analysis of unknown tags on serial analysis of gene expression // FEBS J. 2008. V. 275(21). PP. 5422-548. doi:10.1111/j.1742-4658.2008.06671.x. 95. Yeku O., Frohman M.A. Rapid amplification of cDNA ends (RACE) // Methods Mol. Biol. 2011. V. 703. PP. 107-122. doi:10.1007/978-1-59745-248-9_8. 96. Yip C.C., Sridhar S., Leung K.H., Ng A.C., Chan K.H., Chan J.F., Tsang O.T., Hung I.F., Cheng V.C., Yuen K.Y., To K.K. Development and Evaluation of Novel and Highly Sensitive Single-Tube Nested Real-Time RT-PCR Assays for SARS-CoV-2 Detection // Int. J. Mol. Sci. 2020. V. 21(16). 5674. doi:10.3390/ijms21165674. 97. Yourno J. A method for nested PCR with single closed reaction tubes // PCR Methods Appl. 1992. V. 2(1). PP. 60-65. doi:10.1101/gr.2.1.60. 98. Zhang R.Q., Li Z., Li G.X. et al. A highly sensitive one-tube nested quantitative real-time PCR assay for specific detection of Bordetella pertussis using the LNA technique // Int. J. Infect, Dis. 2020. V. 93. PP. 224-230. doi:10.1016/j.ijid.2020.01.053. 99. Zimmermann K., Plaimauer B., Schögl D., Mannhalter J.W. Detection of false-negative results in nested primer PCR of proviral HIV-1 DNA // Biotechniques. 1997. V. 23(5). PP. 882-884, 886, 888. doi:10.2144/97235st04.