Энхансеры ПЦР. I. Общие сведения

ПЦР ‒ самый популярный метод амплификации нуклеиновых кислот, характеризующийся высокой специфичностью и чувствительностью и нашедший применение, как в научных исследованиях, так и на практике. Однако при ПЦР-амплификации нуклеотидных последовательностей, называемых «трудными» матрицами, могут быть получены ложно-негативные результаты, когда мишень в реакционной смеси присутствует, но не обнаруживается. К такому же результату могут приводить соединения-примеси, совместно экстрагируемые с нуклеиновыми кислотами и ингибирующие ДНК-полимеразу. Для устранения указанной проблемы в реакционную смесь вносят вещества, называемые ПЦР-энхансерами, способные стабилизировать работу ДНК-полимеразы и/или, напротив, дестабилизировать водородные связи в GC-богатых участках, что позволяет, в том числе вести амплификацию длинных матриц. Описано использование в качестве ПЦР-энхансеров белков, аминокислот, углеводов, многоатомных спиртов, амидов, сульфонов, сульфоксидов, неионных детергентов, цвиттерионных соединений, различных наночастиц, а также аналогов дГТФ и дЦТФ, образующих две водородные связи вместо трех при спаривании с комплементарными им азотистыми основаниями.